MTT细胞活性检测 服务简介: 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力。 噻唑兰,简称MTT,可透过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的Formazan结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。 服务优势: 简单、快速、准确。 应用举例: 1.新药筛选; 2.细胞毒性试验; 3.肿瘤放射敏感性实验。 服务流程: 1.细胞处理; 2.细胞计数; 3.盼兰染色法测细胞活力; 4.MTT法测细胞相对数和相对活力。 普通MTT法实验步骤: 1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul。 2:培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。 3:呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul。继续孵育4 h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10min,使结晶物充分溶解。 4:比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。 药物MTT法实验步骤 贴壁细胞: 1:收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度1000- 10000 孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。 2:5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药。一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔。建议设5个,否则难以反应真实情况 3:5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。 4:每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。 5:终止培养,小心吸去孔内培养液。 6:每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。 7:同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。 收费标准/服务周期/提供结果: 欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。 【本公司合作项目】 慢病毒,腺病毒,RNAi类,分子生物实验,病理实验,免疫学实验,细胞实验,动物实验,蛋白组学实验等,能够进行药效学评价、毒理学评价、细胞药筛、动物建模、病理检测、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析服务! 详情请咨询: 【公司网站】www.mxbio.cn 【公司电话】021-54581185 【技术咨询】13916322264 【公司邮箱】shmxbio@163.com 【公司地址】上海市闵行区沧源路1200号2218室 更新时间:2024/1/3 11:42:10 标签:MTT细胞活性检测/MTT细胞增殖检测/MTT检测/MTT细胞毒性检测 |